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細(xì)胞凋亡周期

細(xì)胞凋亡周期

概念:

細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死不同,是由細(xì)胞自主的有序的死亡,涉及一系列基因的嚴(yán)格調(diào)控。是為了群體更好地適應(yīng)生存環(huán)境而采取的細(xì)胞應(yīng)對措施。通常表現(xiàn)為體積縮小、細(xì)胞核碎裂、胞質(zhì)固縮和細(xì)胞膜破裂等特征。Annexin-V(膜連蛋白V)識別凋亡或壞死細(xì)胞表面的磷脂酰絲氨酸。PI(碘化丙啶)能與DNA結(jié)合的熒光染料,不能透過完整的細(xì)胞膜。

真核細(xì)胞周期包含細(xì)胞的生長、復(fù)制和分裂等一系列事件。細(xì)胞周期即為以分裂周期為單位的細(xì)胞發(fā)展過程。G1期(第1生長期)細(xì)胞生成RNA和蛋白質(zhì)誘導(dǎo)生長,DNA含量無變化;S期(合成期)進(jìn)行DNA合成,DNA含量逐漸增加;G2期(第2生長期)DNA復(fù)制后繼續(xù)生長,為有絲分裂做準(zhǔn)備,DNA的量為原來的兩倍;M期(有絲分裂期)發(fā)生細(xì)胞核分裂和細(xì)胞質(zhì)分裂,產(chǎn)生兩個子細(xì)胞。將能DNA結(jié)合的熒光染料(常用PI)與細(xì)胞共同孵育,染料與細(xì)胞中的DNA按比例結(jié)合。用流式細(xì)胞術(shù)可以檢測DNA含量在細(xì)胞群中的分布情況。

原理與方法:

細(xì)胞凋亡:制備單細(xì)胞懸液。棄去培養(yǎng)基,以PBS潤洗一次,加入Annexin V-PI結(jié)合液重懸細(xì)胞,加入Annexin V-PI室溫下避光孵育約15min。將染色完成的細(xì)胞避光冰浴,進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測。

細(xì)胞周期:制備單細(xì)胞懸液,以PBS洗滌一次,固定細(xì)胞。以預(yù)冷的PBS洗滌一次后,加入PI染色液37℃避光孵育30min,隨機(jī)進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測。


                                                             細(xì)胞凋亡檢測/細(xì)胞周期檢測

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