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蛋白互作IP/Co-IP/ChIP

蛋白互作IP/Co-IP/ChIP

概念:

免疫沉淀(IP):免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)是一種利用抗體對特定蛋白進(jìn)行純化的技術(shù)。通過特異性抗體與目標(biāo)蛋白的結(jié)合,可以將目標(biāo)蛋白從細(xì)胞裂解液中沉淀下來,用于后續(xù)的分析。IP主要用于檢測單個(gè)蛋白的狀態(tài),如表達(dá)量、翻譯后修飾等。

免疫共沉淀(Co-IP):免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation, Co-IP)是一種研究兩種蛋白在體內(nèi)是否存在相互作用的有效方法。通過已知蛋白的抗體捕獲整個(gè)蛋白復(fù)合物,進(jìn)而研究復(fù)合物中與已知蛋白存在相互作用的蛋白。Co-IP的關(guān)鍵在于保持蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的天然狀態(tài),因此通常采用非離子變性劑進(jìn)行細(xì)胞裂解。

染色質(zhì)免疫沉淀(ChIP):染色質(zhì)免疫沉淀(Chromatin Immunoprecipitation, ChIP)用于研究蛋白質(zhì)與DNA之間的相互作用,常用于檢測轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)。ChIP通過抗原抗體的特異性結(jié)合,沉淀與目的蛋白相結(jié)合的DNA片段,反映結(jié)合在DNA序列上的調(diào)控蛋白。


區(qū)別:

IP主要檢測單個(gè)蛋白的狀態(tài),而Co-IPChIP用于研究蛋白之間的相互作用。

Co-IP研究的是體內(nèi)自然狀態(tài)下的蛋白質(zhì)互作,而ChIP專注于蛋白質(zhì)與DNA之間的相互作用。

Co-IP結(jié)果可能包含間接相互作用,而ChIP通常用于直接的蛋白質(zhì)-DNA相互作用研究。

注意事項(xiàng):

1. 細(xì)胞裂解條件:Co-IP實(shí)驗(yàn)中,應(yīng)采用溫和的裂解條件以保持蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用,多采用非離子變性劑如Np40或Triton x-100。

2. 抗體選擇:需要使用特異性強(qiáng)的抗體,以確保沉淀的蛋白是由所加入的抗體沉淀得到的,而非外源非特異蛋白。

3. 對照實(shí)驗(yàn):進(jìn)行Co-IP時(shí),應(yīng)使用對照抗體,如正常小鼠IgG或另一類單抗,以排除非特異性結(jié)合。

4. 蛋白質(zhì)定位:確定蛋白間的相互作用是發(fā)生在細(xì)胞中,而不是由于細(xì)胞的溶解才發(fā)生的,這需要進(jìn)行蛋白質(zhì)的定位來確定。

5. ChIP實(shí)驗(yàn):包括細(xì)胞固定、染色質(zhì)斷裂、染色質(zhì)免疫沉淀、交聯(lián)反應(yīng)的逆轉(zhuǎn)、DNA的純化及鑒定等步驟,可以用PCR或者高通量測序鑒定DNA與蛋白質(zhì)的結(jié)合情況。


我們提供的實(shí)驗(yàn)結(jié)果形式如下:

1、實(shí)驗(yàn)報(bào)告:包含實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、操作步驟、結(jié)果分析等詳細(xì)描述,以及實(shí)驗(yàn)中使用的抗體、試劑和儀器等信息。

2、圖像數(shù)據(jù):包括Western Blot、免疫沉淀后的凝膠圖像,以及ChIP實(shí)驗(yàn)中的PCR或測序結(jié)果圖。

3、數(shù)據(jù)分析:提供蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)圖,以及通過質(zhì)譜鑒定得到的蛋白質(zhì)列表和相對豐度。

4、技術(shù)支持:我們提供售后技術(shù)支持,確??蛻粼谙掠螌?shí)驗(yàn)及投稿過程中的問題得到及時(shí)解決

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